SA-β-gal的检测方法，你了解多少？

　　生衰退的变化过程。细胞衰老时，衰老相关半乳糖苷酶(SA-β-gal)的活性会显著增加，故常常检测衰老相关半乳糖苷酶的活性以区分正常细胞与衰老细胞。目前，不同条件或化合物作用细胞后，常常用衰老相关半乳糖苷酶检测作为细胞衰老的标志之一。
 

　　SA-β-gal检测方法主要分为细胞化学染色法和荧光法。
 

　　一、细胞化学染色法：SA-βgal在pH6.0时，可将5-溴-4-氯-3-吲哚基β-D-吡喃半乳糖苷水解，产生不溶于水的蓝色物质。这种蓝色产物相当稳定，固定干燥后避光可保存几个月。通过计算总群体中蓝色细胞的数量，可以很容易地确定SA-β-半乳糖苷酶阳性的细胞比例，即衰老细胞的比例。但是需要注意的是，在所有细胞中普遍存在酸性半乳糖苷酶，在pH4.0时发挥作用。其实SA-βgal发挥作用的最适pH为4.5，但是在pH4.5时，酸性半乳糖苷酶也会水解底物，因此需要使用SA-βgal次适pH6.0，才能确保蓝色产物是由于SA-βgal的作用而产生的。通常我们使用pH为6.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。
 

　　二、荧光法：荧光法需要借助另一种底物——C12FDG，不具有荧光，能透过细胞膜，但被βgal水解后可产生绿色荧光产物。利用流式细胞仪可检测绿色荧光的产生，藉此反映βgal的表达。因此要想检测SA-βgal的活性，需要先将溶酶体碱化至pH6.0。这一过程可使用氯喹或巴弗洛霉素A1等，可降低溶酶体的酸度，使溶酶体碱化至pH6.0。然后向细胞中加入C12FDG，孵育后制成可供流式分析细胞悬液，即可利用FC500MPL流式细胞仪等检测SA-βgal的表达。
 

　　SA-β-gal细胞化学染色法通常需要半小时染色，数小时甚至一天时间等待染色完成以观察和计数，而荧光法需要4至8小时处理细胞，1天内可完成计数。前者不仅可用于细胞培养液还可用以组织切片的染色，而且所需试剂和设备简单，而后者更为高效，灵敏，定量更为准确。因此，根据实验的不同目的可选择不同的检测方法。