TUNEL细胞凋亡检测试剂盒（绿色荧光）

其原理是在末端脱氧核糖核苷酸转移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）的作用下，在基因组DNA断裂时暴露出的3´-羟基（3´-OH）末端掺入被Alexa Fluor 488染料标志的dUTP，使凋亡的细胞被标志上绿色荧光，从而可以用荧光显微镜或流式细胞仪检测。

本试剂盒为直接荧光标志法的TUNEL染色，染色步骤简便，应用范围广泛，可用于检测冰冻切片、石蜡切片和培养细胞的凋亡情况。
包装清单：

TUNEL细胞凋亡检测试剂盒产品组成：

保存条件：

-20 ℃保存，一年有效。

操作步骤：

1、样本处理：

a) 石蜡切片：经二甲笨、酒精脱蜡，复水。脱蜡应充分。

b) 冰冻切片：流水冲洗，去除OCT包埋胶后，用纯水洗3次。

c) 细胞飞片：用组织固定液固定后，用PBS洗三次，每次5分钟。1% Triton X-100处理10分钟，用PBS洗三次，每次5分钟。

2、蛋白酶消化

将1ul 试剂（A）50× Proteinase K稀释于50ul PBS中，滴加到组织上，37℃孵育10-20分钟。消化结束后，用PBS洗三次，每次5分钟。

3、阳性对照组织的处理

将组织用DNase I消化，以获得断裂的DNA，即成Tunel染色阳性的对照。阳性对照组织也可以选用小鼠的小肠组织切片。

将50 ul DNase I消化液滴加于组织上，37℃孵育10-30分钟，消化结束后，用PBS洗三次，每次5分钟。

4、Tunel标志染色:

Tunel标志染色前用50 ul Equilibration Buffer孵育标本5-10分钟。孵育过程中按下表配制Tunel染色工作液。去除标本上的Equilibration Buffer后，直接滴加50ul Tunel染色液，37℃孵育1-2小时，染色结束后，用PBS洗三次，每次5分钟。

5、封片：

每组织上滴加一滴封剂，小心盖上盖玻片，避免产生气泡。用吸水纸吸去多余的封片剂。荧光显微镜下观察。

注意事项：

1、Proteinase K 消化时间需要摸索，冰冻切片 10 min 左右，石蜡切片时间应适当延长。

2、阴性对照体系：配制Tunel染色工作液时用纯水替代TdT Enzyme。

3、悬浮细胞用离心的方法收集细胞，所有反应在离心管中进行，染色结束后，可在荧光显微下观察，也可以用流式细胞仪检测。

4、Tunel标志染色时应注意避光。

5、实验过程中请穿戴手套、实验服等，做好个人防护。