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TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(绿色荧光)

更新日期:2021-08-02

访问量:86

厂商性质:生产厂家

所在城市:上海市

简要描述:
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(Alexa Fluor 488):
细胞凋亡时,部分DNA内切酶会被激活,进而切断基因组DNA。TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling) 细胞凋亡检测试剂盒可以用来检测组织细胞在凋亡晚期过程中细胞核DNA的断裂情况。
品牌自营品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,生物产业

其原理是在末端脱氧核糖核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的作用下,在基因组DNA断裂时暴露出的3´-羟基(3´-OH)末端掺入被Alexa Fluor 488染料标志的dUTP,使凋亡的细胞被标志上绿色荧光,从而可以用荧光显微镜或流式细胞仪检测。

本试剂盒为直接荧光标志法的TUNEL染色,染色步骤简便,应用范围广泛,可用于检测冰冻切片、石蜡切片和培养细胞的凋亡情况。
包装清单:

产品编号产品名称包装1包装2
SJ1272TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(Alexa Fluor 488)20T50T
说明书一份



TUNEL细胞凋亡检测试剂盒产品组成:

编号

组分

20T

50T

试剂(A)

50× Proteinase K

20 ul

100 ul

试剂(B)

10 × DNase I Buffer

100 ul

500 ul

试剂(C)

DNase I

20 ul

100 ul

试剂(D)

Equilibration Buffer

2 ml

10 ml

试剂(E)

5×TdT Enzyme Buffer

200 ul

1 ml

试剂(F)

Recombinant TdT Enzyme

20 ul

100 ul

试剂(G)

Alexa Fluor 488-dUTP

20 ul

100 ul

试剂(H)

dATP

20 ul

100 ul

试剂(I)

封片剂(含DAPI)

1.5 ml

7.5 ml


保存条件:

-20 ℃保存,一年有效。

操作步骤:

1、样本处理:

a) 石蜡切片:经二甲笨、酒精脱蜡,复水。脱蜡应充分。

b) 冰冻切片:流水冲洗,去除OCT包埋胶后,用纯水洗3次。

c) 细胞飞片:用组织固定液固定后,用PBS洗三次,每次5分钟。1% Triton X-100处理10分钟,用PBS洗三次,每次5分钟。

2、蛋白酶消化

将1ul 试剂(A)50× Proteinase K稀释于50ul PBS中,滴加到组织上,37℃孵育10-20分钟。消化结束后,用PBS洗三次,每次5分钟。

3、阳性对照组织的处理

将组织用DNase I消化,以获得断裂的DNA,即成Tunel染色阳性的对照。阳性对照组织也可以选用小鼠的小肠组织切片。

纯水

46 ul

试剂(B): 10 × DNase I Buffer

5 ul

试剂(C): DNase I

1 ul

共计

50 ul

将50 ul DNase I消化液滴加于组织上,37℃孵育10-30分钟,消化结束后,用PBS洗三次,每次5分钟。

4、Tunel标志染色:

Tunel标志染色前用50 ul Equilibration Buffer孵育标本5-10分钟。孵育过程中按下表配制Tunel染色工作液。去除标本上的Equilibration Buffer后,直接滴加50ul Tunel染色液,37℃孵育1-2小时,染色结束后,用PBS洗三次,每次5分钟。

试剂(D)Equilibration   Buffer

37 ul

试剂(E)5×TdT Enzyme   Buffer

10 ul

试剂(F)Recombinant   TdT Enzyme

1 ul

试剂(G)Alexa Fluor   488-dUTP

1 ul

试剂(H)dATP

1 ul

共计

50 ul

5、封片:

每组织上滴加一滴封剂,小心盖上盖玻片,避免产生气泡。用吸水纸吸去多余的封片剂。荧光显微镜下观察。


注意事项:

1、Proteinase K 消化时间需要摸索,冰冻切片 10 min 左右,石蜡切片时间应适当延长。

2、阴性对照体系:配制Tunel染色工作液时用纯水替代TdT Enzyme。

3、悬浮细胞用离心的方法收集细胞,所有反应在离心管中进行,染色结束后,可在荧光显微下观察,也可以用流式细胞仪检测。

4、Tunel标志染色时应注意避光。

5、实验过程中请穿戴手套、实验服等,做好个人防护。




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