产品中心您的位置:网站首页 > 产品中心 > > 试剂 > SJ1271TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(DAB显色法)

TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(DAB显色法)

更新日期:2021-07-27

访问量:79

厂商性质:生产厂家

所在城市:上海市

简要描述:
细胞凋亡时,部分DNA内切酶会被激活,进而切断基因组DNA。TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling) 细胞凋亡检测试剂盒可以用来检测组织细胞在凋亡晚期过程中细胞核DNA的断裂情况。
品牌自营品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,生物产业

其原理是在末端脱氧核糖核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的作用下,在基因组DNA断裂时暴露出的3´-羟基(3´-OH)末端掺入生物素(Biotin)标志的dUTP,随后通过Biotin与连接辣根过氧化酶的链霉亲和素(Streptavidin-HRP)特异结合,在辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺(DAB)的存在下,产生深棕色的不溶物,从而特异准确地定位凋亡的细胞。

本试剂盒可用于石蜡切片、冰冻切片和细胞样本(细胞涂片或爬片)的凋亡原位检测,检测结果可在普通光学显微镜下直接观察计数。
包装清单:

产品编号产品名称包装1包装2
SJ1271
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(DAB显色法)20T50T
说明书一份



产品组成:

编号

组分

20T

50T

储存条件

试剂(A)

50× Proteinase K

20 ul

100 ul

-20℃

试剂(B)

10 × DNase I Buffer

100 ul

500 ul

-20℃

试剂(C)

DNase I

20 ul

100 ul

-20℃

试剂(D)

Equilibration Buffer

2 ml

10 ml

-20℃

试剂(E)

5×TdT Enzyme Buffer

200 ul

1 ml

-20℃

试剂(F)

Recombinant TdT Enzyme

20 ul

100 ul

-20℃

试剂(G)

Biotin-11-dUTP

20 ul

100 ul

-20℃

试剂(H)

dATP

20 ul

100 ul

-20℃

试剂(I

Streptavidin-HRP

20 ul

100 ul

4℃

试剂(J

DAB-A solution

1 ml

5 ml

-20℃

试剂(K

DAB-B solution

50 ul

250 ul

-20℃


保存条件:

Streptavidin-HRP, 4℃, 其余试剂-20 ℃保存,一年有效。

操作步骤:

1、样本处理:

a) 石蜡切片:经二甲笨、酒精脱蜡,复水。脱蜡应充分。

b) 冰冻切片:流水冲洗,去除OCT包埋胶后,用纯水洗3次。

c) 细胞飞片:用组织固定液固定后,用PBS洗三次,每次5分钟。1% Triton X-100处理10分钟,用PBS洗三次,每次5分钟。

2、蛋白酶消化

将1ul 试剂(A)50× Proteinase K稀释于50ul PBS中,滴加到组织上,37℃孵育10-20分钟。消化结束后,用PBS洗三次,每次5分钟。

3、封闭

用3%的双氧水(H2O2)室温封闭10分钟,封闭结束后用PBS洗三次,每次5分钟。

4、阳性对照组织的处理

将组织用DNase I消化,以获得断裂的DNA,即成Tunel染色阳性的对照。阳性对照组织也可以选用小鼠的小肠组织切片。

纯水

46 ul

试剂(B): 10 × DNase I Buffer

5 ul

试剂(C): DNase I

1 ul

共计

50 ul

50 ul DNase I消化液滴加于组织上,37℃孵育10-30分钟,消化结束后,用PBS洗三次,每次5分钟。

5、连接:

连接反应前用50 ul Equilibration Buffer孵育标本5-10分钟。孵育过程中按下表配制连接工作液。去除标本上的Equilibration Buffer后,直接滴加50ul 连接工作液,37℃孵育1-2小时,染色结束后,用PBS洗三次,每次5分钟。

试剂(D)Equilibration   Buffer

37 ul

试剂(E)5×TdT Enzyme   Buffer

10 ul

试剂(F)Recombinant   TdT Enzyme

1 ul

试剂(G)Biotin-11-dUTP

1 ul

试剂(H)dATP

1 ul

共计

50 ul

6、标志

取1 ul 试剂(I)Streptavidin-HRP加入到50ul PBS 中,混匀后滴加至组织上,37℃避光孵育30分钟,随后用PBS洗三次,每次5分钟。

7、显色

取50 ul 试剂(J)DAB-A solution 与2.5 ul 试剂(K)DAB-B solution混匀后,滴加至组织上,室温显色反应30秒至5分钟。显色结束后,用PBS洗三次,每次5分钟

8、苏木素复染

每组织上滴加数滴Mayer’s苏木素染色液,染色1-5分钟,随后用自来水冲洗反蓝,如苏木素染色过深,可用1%盐酸酒精溶液分化数秒,再次反蓝;如苏木素染色过浅,可用苏木素再次染色,并延长染色时间。

9、封片观察

经梯度酒精脱水,二甲苯透明后,滴加中性树胶,加盖玻片封片,光学显微镜下观察拍照。

注意事项:

1、Proteinase K 消化时间需要摸索,冰冻切片 10 min 左右,石蜡切片时间应适当延长。

2、阴性对照体系:配制连接工作液时用纯水替代TdT Enzyme。

3、连接与标志反应时应注意避光。

4、实验过程中请穿戴手套、实验服等,做好个人防护。

备注

         产品信息可能会有优化升级,请以实际标签信息为准

本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

为了您的安全和健康,请在实验过程中做好防护工作



留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7

联系我们

contact us

咨询电话

13917336314

扫一扫,关注我们

返回顶部