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油红o染色液的染色步骤及其注意事项分析

发布时间:2022-12-12   点击次数:90次
  油红o染色液的染色步骤:
 
  1、先小心轻缓倒去培养夜。
 
  2、用pbs轻缓漂洗(不洗没问题)。
 
  3、加10%中性甲醛固定30min(实际固定时间过夜都没问题。固定液用95%酒精也)。固定的是细胞膜。
 
  4、稀释油红储存液,油红:去离子水=3:2,滤纸过滤,室温放置10min(除去一些杂质,染色结果更清晰)
 
  5、染色10min左右,加的体积覆盖住板底即可,如6孔加1.5ml,24孔加0.5-1ml(实际染色时间1小时都可以)。
 
  6、脱色,用75%酒精/60%异丙醇漂洗,除去多余的染料(实际用其他平衡液洗也没问题,背景并不会残留多少)
 
  7、复染,淡苏木染色115分钟,pbs漂洗(这一步不做也可,看试验需要,并且苏木素会把胞浆染红,如要显示核,hoechst33342也可以,浓度5微克/毫升染10分钟即可把核染上)。
 
  8、甘油明胶封片(封片后可长期保存)。
 
  9、显微镜观察。
 
  油红o染色液的染色注意事项:
 
  (1)脂肪油红染色,有的是动物/人体脂肪组织切片,或细胞爬片。
 
  (2)成熟饱满的脂肪细胞,容易破裂,脂滴泄漏,所以压片,切片都要考虑到这个问题。
 
  (3)细胞爬片细胞溶液脱落,特别是脂滴大的。操作务要轻柔。不要把细胞冲掉。
 
  (4)如果做脂肪组织冰冻切片,冰冻温度比普通要低,切片厚度加厚。

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