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详细介绍MTT细胞增殖检测试剂盒的操作步骤

更新时间:2023-02-13   点击次数:705次
  MTT细胞增殖检测试剂盒被广泛应用于由诱导剂和抑制剂引起的细胞增殖活性变化的体外检测,也可以用于一些生物活性因子的活性检测、药物筛选、细胞毒性测定等。
 
  MTT细胞增殖检测试剂盒含有足够的试剂用于评估在96孔板中进行960次测定或在24孔板中进行192次测定。细胞可以被镀,然后用影响增殖的化合物或药剂。然后用增殖试剂检测细胞,在活细胞中由黄色四唑MTT转化为紫色福尔马赞形式细胞还原酶。
 
  MTT细胞增殖检测试剂盒的操作步骤:
 
  1、制备含有0.1-1.0x106的细胞悬液培养基中的细胞/ml。
 
  2、将每孔100μL加入96孔细胞培养板或每孔500μL加入24孔细胞培养物中有或没有待测化合物的板。细胞在37°C和5%培养24-96小时加湿培养箱中的二氧化碳。
 
  3、加入10μlCytoSelect™MTT细胞增殖测定试剂,如果使用96-孔板,或24孔板的每个孔50µL。
 
  4、在37°C和5%CO2下孵育平板3-4小时,直至可见紫色沉淀(细胞在光学显微镜下可以更精确地观察到沉淀物)。
 
  5、在96孔板的每孔中加入100μL去污剂溶液,或在24孔板的每孔中加入500μL去污剂溶液盘子。
 
  6、在室温下孵育2小时至避光过夜。
 
  注意:在井中与洗涤剂溶液长时间孵育可能导致沉淀或浑浊可以增加背景。如果观察到沉淀,将板在37℃加热10-20分钟并搅拌溶解沉淀物。
 
  7、使用540-570nm作为主波长读取吸光度。