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如何正确使用细胞冻存液进行细胞冻存?

更新时间:2024-01-15   点击次数:179次
  细胞冻存是将细胞置于低温下保存的过程,以延长其存活时间和保持其功能活性。正确使用进行细胞冻存是确保细胞存活和质量的关键步骤。下面是一些正确使用细胞冻存液进行细胞冻存的步骤:
 
  1、准备细胞:首先,需要选择适合冷冻保存的细胞类型,并确保其生长状态良好。通常,最好在细胞达到对数生长期时进行冻存。
 
  2、洗涤细胞:将培养基从培养瓶或培养皿中倒掉,用无菌PBS(磷酸盐缓冲盐水)洗涤细胞两次,以去除残留的培养基和血清。
 
  3、收集细胞:使用合适的方法收集细胞,例如通过离心使细胞沉淀,然后用无菌移液管轻轻吸出细胞。
 
  4、悬浮细胞:将收集到的细胞悬液转移到含有适当体积的细胞冻存液中。通常,它的浓度为10%DMSO(二甲亚砜)+90%基础培养基。可以根据不同细胞类型和实验室的要求进行调整。
 

细胞冻存液

 

  5、混合细胞:将细胞悬液与其充分混合,确保每个细胞都被均匀涂覆。可以使用旋转器或手动轻轻摇动来混合。
 
  6、分装细胞:根据需要,将混合好的细胞悬液分装到冻存管中。每个冻存管中的体积应根据细胞类型和预期的复苏次数来确定。通常,每个冻存管中的体积不应超过总体积的10%。
 
  7、标记和记录:在每个冻存管上标记细胞的名称、日期和冻存编号等信息。同时,还应记录有关细胞的信息,如来源、种类和传代次数等。
 
  8、冷冻细胞:将分装好的冻存管放入冷冻器中,逐渐降低温度至-80°C或更低的温度。降温速率应控制在1°C/分钟以下,以避免冰晶的形成对细胞造成损伤。
 
  9、储存细胞:将冷冻的细胞存放在-80°C或更低的温度下的冷冻器中。确保冷冻器的温度稳定且无振动或其他干扰因素。
 
  总之,正确使用细胞冻存液进行细胞冻存需要注意选择合适的细胞类型、控制降温速率、避免污染和振动等因素,以确保细胞的存活和质量。