无血清细胞冻存液的冻存方式和注意事项

　　无血清细胞冻存液原位冻存方式：从培养状态良好的细胞培养板中将培养基上清吸取干净，再加入适量细胞冻存液于培养孔板中，充分浸润细胞，盖上盖板，做好密封措施，防止染菌，然后直接将含冻存液的细胞培养板放入-80℃冰箱，冷冻保存。
 

　　无血清细胞冻存液原位复苏方式：从冰箱取出冻存培养板，立即放入37℃水浴槽中快速解冻。待冻存的细胞悬液*融化后，轻轻吸去细胞冻存液，按照常规换液操作加入新鲜培养基继续进行培养。
 

　　冻存管冻存方式：按照常用方法收集悬浮细胞或贴壁细胞于试管中，按照培养细胞密度和所用细胞冻存管的尺寸计算所需冻存细胞数。取相当于所需细胞数的细胞悬浮液量，置于离心管中，离心收集培养细胞。移去离心管中的上清液，再加入适量细胞冻存液于离心管中，缓慢混合均匀，制成细胞混合液。将离心管中的细胞混合液分装于已标示的冷冻保存管中，直接将含细胞悬液的冻存管放入-80℃冰箱，冷冻保存。
 

　　无血清细胞冻存液注意事项：细胞冻存液在冻存细胞分装后，应减少在外存放时间，尽快移入-80℃超低温冰箱。选择冻存处于对数生长期的细胞有助于提高复苏细胞存活率。对于干细胞(ES细胞)，原代细胞等冻存时，应该事先将所冻存的细胞进行至少为期一周的干产品试验性细胞冻存培养，确认性能后在进行正式冻存。