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3分钟学会电泳转移缓冲液的使用方法

更新时间:2023-04-15   点击次数:985次
  电泳转移缓冲液是一种运用于分子生物学研究中电泳技术的重要试剂。电泳转移缓冲液的功能是在电泳结束后将凝胶中分离的带状DNA、RNA、蛋白质等生物分子转移到光滑的硬膜上,以便后续的检测、识别、定量等工作。
 
  电泳转移缓冲液的使用方法,一般包括以下几个环节:
 
  1、准备光滑硬膜
 
  在开始转移之前,需要将需要转移的生物分子的质量标准分离带通过电泳移至凝胶中央,在这之后,需要准备一块光滑的硬膜来接收分离的带状分子。硬膜的材质一般是聚氟乙烯、聚丙烯或硅胶等。
 
  2、泡制电泳缓冲液
 
  根据特定的样品,需要选择特殊的电泳缓冲液,可分为常用的转移缓冲液和蛋白质转移缓冲液两种。常规转移缓冲液的一般组成为甲酸(0.06M)和Tris-蛋白酸(0.025M),pH值调节至8.3左右。蛋白质转移缓冲液的组成也不同,其中包括引物、脯氨酸和甘氨酸等。在制备电泳缓冲液时,一般需要将其溶解于水中,并将pH值调整到的水平。
 
  3、组装电泳转移单元
 
  在电泳转移之前,需要将制备的硬膜放置在电泳转移单元的阳极侧。在阳极侧的上面,可以摆放吸水毛细管,在电泳缓冲液池的顶部也需要安装带滤纸的离子加工盒子。在开始时,先在离子加工盒子、水毛细管和硬膜之间放置吸水纸和滤纸,以防止在生物分子传输中产生空气泡。
 
  4、开始转移
 
  在准备好电泳转移单元之后,需要将调节pH值的电泳缓冲液盛放于电泳池中。之后,将已切割的凝胶贴上硬膜,然后将其压至硬膜表面。在准备好凝胶的条件之下,将准备好的凝胶一起悬挂于已装载了溶液的铂络合物缓冲池中。随着负极电流流过,生物分子带将逐渐迁移到硬膜上。转移时间一般根据具体的生物分子质量确定,通常设置在半小时至数小时之间。
 
  5、染色和检测
 
  经过电泳转移和硬膜固定后,需要进一步处理并检测生物分子的表现情况。染色一般使用银染、Coomassie蓝染色或卡罗林钴染色等方法。之后,使用荧光探针、放射性探针或酶标记法等技术进行检测。