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无血清细胞冻存液的制备方法是什么?

更新时间:2023-05-16   点击次数:885次
  无血清细胞冻存液是一种常用的细胞保存方法,适用于多种类型的细胞,并且可以长期保存在低温条件下。
 
  无血清细胞冻存液的制备步骤:
 
  1.准备培养基
 
  最好使用不含血清的培养基,以减少冻存液中可能存在的血清对细胞存活性的影响。使用无血清培养基时需要注意,必须添加适当的营养物质和生长因子来维持细胞的生长和代谢。
 
  2.细胞检测
 
  检查所需保存的细胞是否符合要求,如细胞的外观、生长状态、染色体数目等。如果细胞有任何异常,就需要进行处理或舍弃。
 
  3.细胞收集
 
  将细胞从培养皿中收集,可以通过倒置培养皿、利用细胞刮片或使用细胞收割机来完成。在收集细胞时需要注意避免损伤细胞膜。
 
  4.细胞计数
 
  使用细胞计数器或显微镜计数室对细胞数量进行计数。确保细胞密度适当,通常建议细胞密度在200,000-500,000个/ml。
 
  5.细胞离心
 
  将细胞离心,去除培养基,并用一些无菌的生理盐水或磷酸缓冲液洗涤细胞,以去除残留培养基和细胞碎片。
 
  6.细胞悬液制备
 
  加入适量的冻存液(通常为含10%甘油和90%培养基的混合物)到细胞悬液中。混匀后分装到无菌冻存管中,每支管放入1-2ml的细胞悬液。
 
  7.细胞冷冻
 
  将分装好的细胞悬液放置于冰盐混合物(-80℃)中快速冷冻,避免出现晶体形成。在冷冻过程中应该尽可能地减少对细胞的损伤。
 
  8.细胞储存
 
  将已经冷冻的细胞转移到液氮罐中进行长期保存,避免温度波动和污染。每次需要使用时,应该迅速将冻存管从液氮罐中取出并进行解冻处理。
 
  总之,制备无血清细胞冻存液需要严格控制细胞密度、培养基组分和处理过程中的温度等多个因素,以确保细胞能够正常存活并长期保存。